常見問題
答:為了確保BiFC實驗熒光信號的真實性,需要排除假陽性的可能性。假陽性可能是由于熒光蛋白片段的非特異性相互作用或其他非目標(biāo)蛋白質(zhì)之間的相互作用引起的。因此,在實驗中應(yīng)設(shè)置對照組,如單獨(dú)表達(dá)熒光蛋白片段或目標(biāo)蛋白的對照組,以排除非特異性相互作用的干擾。也可重復(fù)實驗,保持每次實驗條件(如細(xì)胞類型、培養(yǎng)條件、成像參數(shù)等)的一致性,比較蛋白質(zhì)相互作用結(jié)果是否一致;此外,還可以結(jié)合其他實驗方法,如免疫共沉淀(Co-IP)、酵母雙雜交(Y2H)、GST pull-down和熒光素酶蛋白互補(bǔ)實驗(LCA)等,以多角度、多層次地驗證蛋白質(zhì)相互作用的真實存在。
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